Set trong thời kỳ nhà Minh, “Tiếu ngạo giang hồ: Đông Phương Bất Bại” tiếp tục câu chuyện phiêu lưu của anh chàng Lệnh Hồ Xung và cô bạn gái Nhạc Linh San sau khi họ rời khỏi Hoa Sơn, vì bị ông thầy Nhạc Bất Quần phản bội. Nhạc Linh San đã thầm thương trộm nhớ Lệnh Hồ Xung, nhưng Lệnh Hồ Xung lại si mê một người con gái khác là Nhâm Doanh Doanh, con gái của Nhâm Ngã Hành, viên giáo chủ Nhật Nguyệt Thần Giáo bị Đông Phương Bất Bại lật đổ.
Dù là một gã đàn ông, nhưng vì luyện Quỳ Hoa bảo điển, Đông Phương Bất Bại dần trông giống như một người phụ nữ. Trong một lần vô tình gặp nhau, Lệnh Hồ Xung đã có cảm tình với Đông Phương Bất Bại và quyết định kết thân với kẻ đại ác này. Tuy nhiên, khi mọi sự thật được phơi bày, Lệnh Hồ Xung buộc phải dẹp mọi tình cảm cá nhân sang một bên để tiêu diệt Đông Phương Bất Bại, nhằm mang lại bình yên cho thiên hạ.
