Bộ phim sẽ dẫn dắt người xem trở về với kỷ niệm ngày xưa của Ô Long Viện, nơi mà các chú tiểu có đủ trò nghịch ngợm vui nhộn. Trong “Tân Ô Long Viện: Tiếu Ngạo Giang Hồ”, hai trong ba nhân vật nổi bật từ phần trước sẽ tái xuất, đó là “sư huynh” Ngô Mạnh Đạt, từng nổi tiếng cùng Châu Tinh Trì, và “sư đệ” Hác Thiệu Văn, cậu bạn bụ bẫm và dễ thương.
Trong phần này, Ô Long Viện tổ chức một đợt nhập môn mới, nhưng một số kẻ xấu đã tranh thủ cơ hội này để mưu đồ xấu, nhằm vào viện, gây rắc rối cho mọi người. Thế nhưng, bọn chúng không ngờ rằng mình sẽ phải đối đầu với mấy phần tử “siêu nhây” của Ô Long Viện, trong những tình huống dở khóc dở cười nhưng cực kỳ thú vị.